Academic Journal
Конструирование химерных белков иммунитета Im9, чувствительных к протеазе pS273R вируса африканской чумы свиней
| Τίτλος: | Конструирование химерных белков иммунитета Im9, чувствительных к протеазе pS273R вируса африканской чумы свиней |
|---|---|
| Πηγή: | VII Пущинская конференция «Биохимия, физиология и биосферная роль микроорганизмов», шко- ла-конференция для молодых ученых, аспирантов и студентов «Генетические технологии в микробио- логии и микробное разнообразие». |
| Στοιχεία εκδότη: | Crossref, 2024. |
| Έτος έκδοσης: | 2024 |
| Θεματικοί όροι: | неспецифическая нуклеаза, вирус-кодируемые протеазы, животноводство, ветеринария |
| Περιγραφή: | Данная работа направлена на разработку нового подхода к получению пород сельскохозяйственных животных, устойчивых к вирусным инфекциям. Предлагаемый подход основывается на вовлечении в этот процесс вирус-кодируемых протеаз. Для этого предполагается провести такую модификацию клеток хозяина, чтобы вирус-кодируемые протеазы запускали каскад реакций, приводящий к деградации геномной ДНК вируса неспецифической нуклеазой. Исследования проводятся на модели вируса африканской чумы свиней (АЧС). Вирус АЧС – это крупный, оболочечный вирус с икосаэдрической морфологией и двухцепочечным ДНК геномом размером от 170 до 190 т.п.н. Вирус АЧС вызывает контагиозную геморрагическую болезнь свиней с летальностью близкой к 100%. На территории Российской Федерации первые вспышки АЧС зафиксированы в 2008 г. и продолжаются вплоть до настоящего времени. Разработка эффективной вакцины от АЧС оказалось трудно решаемой задачей. В этой связи активно развивается альтернативное направление, связанное с получением пород сельскохозяйственных животных, генетически устойчивых к определенному инфекционному заболеванию.Цель данной работы является разработка и апробация подхода, основанного на активации неспецифической нуклеазы колицина E9 (Col E9) протеазой pS273R вируса АЧС. Природным ингибитором активности колицина Е9 является белок иммунитета Im9. Для этого в природный ингибитор активности колицина Е9, белок иммунитета Im9, будет введен сайт протеазы pS273R вируса АЧС. Предполагается, что при инфицировании вирусом АЧС, вирус-кодируемая протеаза pS273R будет расщеплять рекомбинантный белок иммунитета и, тем самым, активировать колицин Col E9.Первоначально, нами был сконструирован модифицированный белок иммунитета mIm9, в который содержал сайт протеазы pS273R в положении P56 – D60. Анализ показал, что он также, как и природный белок, обладает способностью эффективно ингибировать активность колицина Е9. Модифицированный белок иммунитета специфически расщепляется протеазой pS273R in vitro и при этом теряет свои ингибирующие свойства. на основе химеры TagRFP-mIm9-TagYFP был сконструирован FRET-сенсор для детекции активности протеазы pS273R вируса АЧС, в том числе в клетках млекопитающих. Тем не менее, при формировании комплекса модифицированного белка иммунитета mIm9 с колицином Е9 сайт, введенный в положение P56 – D60 белка иммунитета, становится недоступен для гидролиза вирусной протеазой. В связи с этим нами были сконструированы три варианта белка иммунитета Im9, содержащие сайт вирусной протеазы в альтернативных участках белковой последовательности. Модифицированные белки иммунитета были очищены и исследована их способность расщепляться протеазой pS273R вируса АЧС как сами по себе, так и в комплексе с колицином Е9. Полученные результаты свидетельствуют о возможности использования протеазы pS273R для активации комплекса «белок иммунитета – колицин Е9» in vitro. |
| Τύπος εγγράφου: | Article Conference object |
| Γλώσσα: | Russian |
| DOI: | 10.34756/geos.2021.17.37960 |
| Αριθμός Καταχώρησης: | edsair.doi...........8ed1bb5d67838a9e6429ad764071745d |
| Βάση Δεδομένων: | OpenAIRE |
| DOI: | 10.34756/geos.2021.17.37960 |
|---|