| _version_ |
1828462395872247808
|
| author |
Κοκκώνη, Ελένη-Άννα
Kokkoni, Eleni-Anna
|
| author2 |
Γκιαούρης, Ευστάθιος
|
| author_facet |
Γκιαούρης, Ευστάθιος
Κοκκώνη, Ελένη-Άννα
Kokkoni, Eleni-Anna
|
| author_sort |
Κοκκώνη, Ελένη-Άννα
|
| collection |
DSpace
|
| description |
Σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν η διερεύνηση της πιθανής ενεργοποίησης της μεταγραφής γονιδίων που σχετίζονται με την αντοχή ή/και τη λοιμογόνο δράση σε δύο στελέχη L. monocytogenes που ανήκουν στους πιο συχνούς οροτύπους που σχετίζονται με λιστερίωση (δηλαδή, 1/2a και 4b). Για το σκοπό αυτό πραγματοποιήθηκε σχετική συγκριτική ποσοτικοποίηση της έκφρασης δέκα γονιδίων (groEL, hly, iap, inlA, inlB, lisK, mdrD, mdrL, prfA και sigB) μετά από και δίχως υποθανατηφόρα αντιμικροβιακή έκθεση των κυττάρων των συγκεκριμένων στελεχών. Αυτό επιτεύχθηκε μέσω της τεχνικής αντίστροφης μεταγραφής και επακόλουθης αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης πραγματικού χρόνου (RT Real-Time PCR).
Για την πρόκληση του υποθανατηφόρου στρες, χρησιμοποιήθηκαν τρεις αντιμικροβιακές ουσίες. Πιο συγκεκριμένα, χρησιμοποιήθηκε ένα συνθετικό βιοκτόνο γενικής χρήσης (το χλωριούχο βενζαλκόνιο, BAC), ένα φυσικό τερπενοειδές φυτικής προέλευσης (η θυμόλη, ΤΗΥ) και ένα αντιβιοτικό β-λακτάμης ευρέως φάσματος (η αμπικιλλίνη, AMP). Κάθε αντιμικροβιακό εφαρμόστηκε για 2 ώρες στους 37 oC σε κύτταρα στάσιμης φάσης του κάθε στελέχους, σε συγκέντρωση που ήταν από δύο έως τέσσερις φορές υψηλότερη από την ελάχιστη που απαιτείται για την αναστολή της πλαγκτονικής ανάπτυξης των βακτηρίων. Συγκεκριμένα, τα BAC, THY και AMP χορηγήθηκαν σε συγκεντρώσεις 4, 312,5 και 0,5 ppm, αντίστοιχα.
Γενικά, η έκφραση των περισσότερων από τα γονίδια που μελετήθηκαν παρέμεινε είτε σταθερή, είτε μειώθηκε σημαντικά μετά την αντιμικροβιακή έκθεση, με ορισμένες διαφορές να καταγράφονται ανάμεσα στα δύο στελέχη. Η θυμόλη ήταν η ένωση που προκάλεσε τη μείωση της έκφρασης των περισσότερων γονιδίων, περιορίζοντας σημαντικά την έκφραση 6/10 γονιδίων στο ένα στέλεχος (ser. 1/2a) και 4/10 γονιδίων στο άλλο στέλεχος (ser. 4b), συμπεριλαμβανομένων αυτά που κωδικοποιούν για τους κύριους ρυθμιστές της απόκρισης στο στρες και της λοιμογόνου δράσης (SigB και PrfA, αντίστοιχα), και στα δύο στελέχη. Παράλληλα όμως, παρατηρήθηκαν αυξημένα επίπεδα έκφρασης στο 4b στέλεχος των δύο γονιδίων που κωδικοποιούν για πρωτεΐνες εισβολής-ιντερναλίνες (InlA και InlB), οι οποίες παίζουν σημαντικό ρόλο στην έναρξη της παθογένεσης του L. monocytogenes.
Τα αποτελέσματα που ελήφθησαν αυξάνουν τις γνώσεις μας σχετικά με τη φυσιολογία της L. monocytogenes υπό κάποιες συγκεκριμένες υποθανατηφόρες αντιμικροβιακές συνθήκες που θα μπορούσαν ενδεχομένως να συναντηθούν στην τροφική αλυσίδα και σε κλινικά περιβάλλοντα και θα μπορούσαν να συμβάλλουν σε καλύτερες και πιο αποτελεσματικές στρατηγικές ελέγχου.
|
| id |
oai:hellanicus.lib.aegean.gr:11610-26389
|
| institution |
Hellanicus
|
| language |
el_GR
|
| publishDate |
2024
|
| record_format |
dspace
|
| spelling |
oai:hellanicus.lib.aegean.gr:11610-263892025-02-08T02:03:01Z Διερεύνηση πιθανής πρόκλησης αντίστασης ή/και μολυσματικότητας σε επιζήσαντα αντιμικροβιακής έκθεσης κύτταρα Listeria monocytogenes μέσω στοχευμένης ανάλυσης γονιδιακής έκφρασης Investigating for possible induction or resistance and/or virulence in surviving antimicrobial exposure Listeria monocytogenes cells through target gene expression analysis Κοκκώνη, Ελένη-Άννα Kokkoni, Eleni-Anna Γκιαούρης, Ευστάθιος υποθανατηφόρα αντιμικροβιακή έκθεση χλωριούχο βενζαλκόνιο θυμόλη αμπικιλλίνη γονιδιακή έκφραση λιστερίωση gene expression stress response listeria monocytogenes Listeria monocytogenes Gene expression Listeriosis Σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν η διερεύνηση της πιθανής ενεργοποίησης της μεταγραφής γονιδίων που σχετίζονται με την αντοχή ή/και τη λοιμογόνο δράση σε δύο στελέχη L. monocytogenes που ανήκουν στους πιο συχνούς οροτύπους που σχετίζονται με λιστερίωση (δηλαδή, 1/2a και 4b). Για το σκοπό αυτό πραγματοποιήθηκε σχετική συγκριτική ποσοτικοποίηση της έκφρασης δέκα γονιδίων (groEL, hly, iap, inlA, inlB, lisK, mdrD, mdrL, prfA και sigB) μετά από και δίχως υποθανατηφόρα αντιμικροβιακή έκθεση των κυττάρων των συγκεκριμένων στελεχών. Αυτό επιτεύχθηκε μέσω της τεχνικής αντίστροφης μεταγραφής και επακόλουθης αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης πραγματικού χρόνου (RT Real-Time PCR). Για την πρόκληση του υποθανατηφόρου στρες, χρησιμοποιήθηκαν τρεις αντιμικροβιακές ουσίες. Πιο συγκεκριμένα, χρησιμοποιήθηκε ένα συνθετικό βιοκτόνο γενικής χρήσης (το χλωριούχο βενζαλκόνιο, BAC), ένα φυσικό τερπενοειδές φυτικής προέλευσης (η θυμόλη, ΤΗΥ) και ένα αντιβιοτικό β-λακτάμης ευρέως φάσματος (η αμπικιλλίνη, AMP). Κάθε αντιμικροβιακό εφαρμόστηκε για 2 ώρες στους 37 oC σε κύτταρα στάσιμης φάσης του κάθε στελέχους, σε συγκέντρωση που ήταν από δύο έως τέσσερις φορές υψηλότερη από την ελάχιστη που απαιτείται για την αναστολή της πλαγκτονικής ανάπτυξης των βακτηρίων. Συγκεκριμένα, τα BAC, THY και AMP χορηγήθηκαν σε συγκεντρώσεις 4, 312,5 και 0,5 ppm, αντίστοιχα. Γενικά, η έκφραση των περισσότερων από τα γονίδια που μελετήθηκαν παρέμεινε είτε σταθερή, είτε μειώθηκε σημαντικά μετά την αντιμικροβιακή έκθεση, με ορισμένες διαφορές να καταγράφονται ανάμεσα στα δύο στελέχη. Η θυμόλη ήταν η ένωση που προκάλεσε τη μείωση της έκφρασης των περισσότερων γονιδίων, περιορίζοντας σημαντικά την έκφραση 6/10 γονιδίων στο ένα στέλεχος (ser. 1/2a) και 4/10 γονιδίων στο άλλο στέλεχος (ser. 4b), συμπεριλαμβανομένων αυτά που κωδικοποιούν για τους κύριους ρυθμιστές της απόκρισης στο στρες και της λοιμογόνου δράσης (SigB και PrfA, αντίστοιχα), και στα δύο στελέχη. Παράλληλα όμως, παρατηρήθηκαν αυξημένα επίπεδα έκφρασης στο 4b στέλεχος των δύο γονιδίων που κωδικοποιούν για πρωτεΐνες εισβολής-ιντερναλίνες (InlA και InlB), οι οποίες παίζουν σημαντικό ρόλο στην έναρξη της παθογένεσης του L. monocytogenes. Τα αποτελέσματα που ελήφθησαν αυξάνουν τις γνώσεις μας σχετικά με τη φυσιολογία της L. monocytogenes υπό κάποιες συγκεκριμένες υποθανατηφόρες αντιμικροβιακές συνθήκες που θα μπορούσαν ενδεχομένως να συναντηθούν στην τροφική αλυσίδα και σε κλινικά περιβάλλοντα και θα μπορούσαν να συμβάλλουν σε καλύτερες και πιο αποτελεσματικές στρατηγικές ελέγχου. The aim of the present study was to investigate the possible transcriptional activation of genes associated with resistance and/or virulence in two strains of L. monocytogenes belonging to the most frequent serotypes associated with listeriosis (i.e., 1/2a and 4b). For this purpose, relative comparative quantification of the expression of ten genes (groEL, hly, iap, inlA, inlB, lisK, mdrD, mdrL, prfA and sigB) was performed after and without sublethal antimicrobial exposure of the cells of the specific strains. This was achieved through the technique of reverse transcription and subsequent real-time polymerase chain reaction (RT Real-Time PCR). To induce sublethal stress, three antimicrobial substances were used. More specifically, a general-purpose synthetic biocide (benzalkonium chloride, BAC), a natural terpenoid of plant origin (thymol, THY) and a broad-spectrum β-lactam antibiotic (ampicillin, AMP) were used. Each antimicrobial was applied for 2 h at 37 oC to stationary phase cells of each strain, at a concentration that was two to four times higher than the minimum required to inhibit planktonic growth of the bacteria. Specifically, BAC, THY and AMP were administered at concentrations of 4, 312.5 and 0.5 ppm, respectively. In general, the expression of most of the genes studied remained either constant or significantly decreased after antimicrobial exposure, with some differences noted between the two strains. Thymol was the compound that caused a decrease in the expression of most genes, significantly reducing the expression of 6/10 genes in one strain (ser. 1/2a) and 4/10 genes in the other strain (ser. 4b), including those that encode for master regulators of stress response and virulence (SigB and PrfA, respectively), in both strains. At the same time, however, increased expression levels were observed in the 4b strain of the two genes that code for invasion proteins-internalins (InlA and InlB), which play an important role in the initiation of L. monocytogenes pathogenesis. The results obtained increase our knowledge about the physiology of L. monocytogenes under some specific sublethal antimicrobial conditions that could possibly be encountered in the food chain and in clinical settings and could contribute to better and more effective control strategies. 2024-05-31T09:06:18Z 2024-05-31T09:06:18Z 2023-09 http://hdl.handle.net/11610/26389 el_GR Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Διεθνές https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ 83 σ. application/pdf Λήμνος
|
| spellingShingle |
υποθανατηφόρα αντιμικροβιακή έκθεση
χλωριούχο βενζαλκόνιο
θυμόλη
αμπικιλλίνη
γονιδιακή έκφραση
λιστερίωση
gene expression
stress response
listeria monocytogenes
Listeria monocytogenes
Gene expression
Listeriosis
Κοκκώνη, Ελένη-Άννα
Kokkoni, Eleni-Anna
Διερεύνηση πιθανής πρόκλησης αντίστασης ή/και μολυσματικότητας σε επιζήσαντα αντιμικροβιακής έκθεσης κύτταρα Listeria monocytogenes μέσω στοχευμένης ανάλυσης γονιδιακής έκφρασης
|
| title |
Διερεύνηση πιθανής πρόκλησης αντίστασης ή/και μολυσματικότητας σε επιζήσαντα αντιμικροβιακής έκθεσης κύτταρα Listeria monocytogenes μέσω στοχευμένης ανάλυσης γονιδιακής έκφρασης
|
| title_full |
Διερεύνηση πιθανής πρόκλησης αντίστασης ή/και μολυσματικότητας σε επιζήσαντα αντιμικροβιακής έκθεσης κύτταρα Listeria monocytogenes μέσω στοχευμένης ανάλυσης γονιδιακής έκφρασης
|
| title_fullStr |
Διερεύνηση πιθανής πρόκλησης αντίστασης ή/και μολυσματικότητας σε επιζήσαντα αντιμικροβιακής έκθεσης κύτταρα Listeria monocytogenes μέσω στοχευμένης ανάλυσης γονιδιακής έκφρασης
|
| title_full_unstemmed |
Διερεύνηση πιθανής πρόκλησης αντίστασης ή/και μολυσματικότητας σε επιζήσαντα αντιμικροβιακής έκθεσης κύτταρα Listeria monocytogenes μέσω στοχευμένης ανάλυσης γονιδιακής έκφρασης
|
| title_short |
Διερεύνηση πιθανής πρόκλησης αντίστασης ή/και μολυσματικότητας σε επιζήσαντα αντιμικροβιακής έκθεσης κύτταρα Listeria monocytogenes μέσω στοχευμένης ανάλυσης γονιδιακής έκφρασης
|
| title_sort |
διερεύνηση πιθανής πρόκλησης αντίστασης ή και μολυσματικότητας σε επιζήσαντα αντιμικροβιακής έκθεσης κύτταρα listeria monocytogenes μέσω στοχευμένης ανάλυσης γονιδιακής έκφρασης
|
| topic |
υποθανατηφόρα αντιμικροβιακή έκθεση
χλωριούχο βενζαλκόνιο
θυμόλη
αμπικιλλίνη
γονιδιακή έκφραση
λιστερίωση
gene expression
stress response
listeria monocytogenes
Listeria monocytogenes
Gene expression
Listeriosis
|
| url |
http://hdl.handle.net/11610/26389
|
| work_keys_str_mv |
AT kokkōnēelenēanna diereunēsēpithanēsproklēsēsantistasēsēkaimolysmatikotētasseepizēsantaantimikrobiakēsekthesēskyttaralisteriamonocytogenesmesōstocheumenēsanalysēsgonidiakēsekphrasēs
AT kokkonielenianna diereunēsēpithanēsproklēsēsantistasēsēkaimolysmatikotētasseepizēsantaantimikrobiakēsekthesēskyttaralisteriamonocytogenesmesōstocheumenēsanalysēsgonidiakēsekphrasēs
AT kokkōnēelenēanna investigatingforpossibleinductionorresistanceandorvirulenceinsurvivingantimicrobialexposurelisteriamonocytogenescellsthroughtargetgeneexpressionanalysis
AT kokkonielenianna investigatingforpossibleinductionorresistanceandorvirulenceinsurvivingantimicrobialexposurelisteriamonocytogenescellsthroughtargetgeneexpressionanalysis
|