| _version_ |
1828460609764589568
|
| author |
Αποστολοπούλου, Ξένια
Apostolopoulou, Xenia
|
| author2 |
Κοντός, Χρήστος
|
| author_facet |
Κοντός, Χρήστος
Αποστολοπούλου, Ξένια
Apostolopoulou, Xenia
|
| author_sort |
Αποστολοπούλου, Ξένια
|
| collection |
DSpace
|
| description |
Η Salmonella είναι ένα αρνητικό κατά Gram βακτήριο της οικογένειας των εντεροβακτηριοειδών. Το είδος το οποίο προκαλεί νόσο στον άνθρωπο είναι το Salmonella enterica. Η Salmonella spp. μεταδίδεται μέσω της έντερο-στοματικής οδού. Ο συχνότερος τρόπος μετάδοσης είναι η κατανάλωση μολυσμένου με κόπρανα τρόφιμου ή νερού. Η κατανάλωση ωμού ή ατελώς μαγειρεμένου μολυσμένου τρόφιμου μπορεί να οδηγήσει σε λοίμωξη.
Η μολυσματική δόση της Salmonella spp. κυμαίνεται, αλλά πλούσιες σε λίπη τροφές όπως η σοκολάτα και το τυρί προστατεύουν το μικροοργανισμό από το γαστρικό οξύ, μειώνοντας τη μολυσματική δόση σε λίγους μικροοργανισμούς. Στη συγκεκριμένη μελέτη, έγινε ανάπτυξη μοριακής μεθοδολογίας PCR για την ανίχνευση βακτηρίων του γένους Salmonella σε ωμά λαχανικά. Για το σκοπό αυτό, τρόφιμα επιμολύνθηκαν σκοπίμως (spike-in) με 1-10 CFU Salmonella typhimurium και επωάσθηκαν σε θερμοκρασία 37οC για 2, 4, 8, 12 και 16 ώρες σε ρυθμιστικό πεπτονούχο νερό.
Ως θετικός μάρτυρας στα ακόλουθα πειράματα, χρησιμοποιήθηκαν τα αντίστοιχα τρόφιμα, τα οποία επωάστηκαν χωρίς προηγουμένως να έχουν επιμολυνθεί με Salmonella typhimurium. Ακολούθως, απομονώθηκε από αυτά DNA με χρήση κατάλληλων στηλών. Η μοριακή μεθοδολογία PCR αναπτύχθηκε για την ενίσχυση ενός τμήματος 779 bp του γονιδίου rseB (sigma-E factor regulatory protein RseB precursor) της Salmonella spp.
Η ανάπτυξη της εν λόγω μεθοδολογίας περιλάμβανε τον απαραίτητο σχεδιασμό ειδικών εκκινητών και τον προσδιορισμό των βέλτιστων συνθηκών (θερμοκρασία υβριδισμού των εκκινητών και συγκέντρωση χλωριούχου μαγνησίου) για την ενίσχυση του εν λόγω τμήματος DNA. Τα προϊόντα της PCR ηλεκτροφορήθηκαν σε πήκτωμα αγαρόζης 1,5%. Με την αναπτυχθείσα μεθοδολογία, κατέστη δυνατή η ανίχνευση της Salmonella spp., ακόμα και σε τρόφιμα που είχαν επωαστεί επί ≥4 ώρες μετά την επιμόλυνση.
Συμπερασματικά, αναπτύχθηκε μια νέα, in-house μεθοδολογία PCR για την ανίχνευση της Salmonella spp. σε τρόφιμα ευρείας κατανάλωσης μειώνοντας τα επίπεδα κινδύνου γαστρεντερικών παθήσεων μέσω μόλυνσης τροφίμων.
|
| id |
oai:hellanicus.lib.aegean.gr:11610-17603
|
| institution |
Hellanicus
|
| language |
el_GR
|
| publishDate |
2017
|
| record_format |
dspace
|
| spelling |
oai:hellanicus.lib.aegean.gr:11610-176032021-02-16T14:12:51Z Ανίχνευση βακτηρίων του γένους Salmonella (Salmonella spp.) σε τρόφιμα ευρείας κατανάλωσης με νέα, υψηλής ευαισθησίας, in-house αναπτυχθείσα μεθοδολογία PCR Detection of bacteria of the Salmonella genus (Salmonella spp.) in widely consumed foods with a novel, highly sensitive, in-house developed PCR methodology Αποστολοπούλου, Ξένια Apostolopoulou, Xenia Κοντός, Χρήστος Τρόφιμα-βακτήρια Σαλμονέλα PCR Food bacteria Bacteria Salmonella Bacteria (URL: http://id.loc.gov/authorities/subjects/sh85010813) Salmonella (URL: http://id.loc.gov/authorities/subjects/sh86004896) Η Salmonella είναι ένα αρνητικό κατά Gram βακτήριο της οικογένειας των εντεροβακτηριοειδών. Το είδος το οποίο προκαλεί νόσο στον άνθρωπο είναι το Salmonella enterica. Η Salmonella spp. μεταδίδεται μέσω της έντερο-στοματικής οδού. Ο συχνότερος τρόπος μετάδοσης είναι η κατανάλωση μολυσμένου με κόπρανα τρόφιμου ή νερού. Η κατανάλωση ωμού ή ατελώς μαγειρεμένου μολυσμένου τρόφιμου μπορεί να οδηγήσει σε λοίμωξη. Η μολυσματική δόση της Salmonella spp. κυμαίνεται, αλλά πλούσιες σε λίπη τροφές όπως η σοκολάτα και το τυρί προστατεύουν το μικροοργανισμό από το γαστρικό οξύ, μειώνοντας τη μολυσματική δόση σε λίγους μικροοργανισμούς. Στη συγκεκριμένη μελέτη, έγινε ανάπτυξη μοριακής μεθοδολογίας PCR για την ανίχνευση βακτηρίων του γένους Salmonella σε ωμά λαχανικά. Για το σκοπό αυτό, τρόφιμα επιμολύνθηκαν σκοπίμως (spike-in) με 1-10 CFU Salmonella typhimurium και επωάσθηκαν σε θερμοκρασία 37οC για 2, 4, 8, 12 και 16 ώρες σε ρυθμιστικό πεπτονούχο νερό. Ως θετικός μάρτυρας στα ακόλουθα πειράματα, χρησιμοποιήθηκαν τα αντίστοιχα τρόφιμα, τα οποία επωάστηκαν χωρίς προηγουμένως να έχουν επιμολυνθεί με Salmonella typhimurium. Ακολούθως, απομονώθηκε από αυτά DNA με χρήση κατάλληλων στηλών. Η μοριακή μεθοδολογία PCR αναπτύχθηκε για την ενίσχυση ενός τμήματος 779 bp του γονιδίου rseB (sigma-E factor regulatory protein RseB precursor) της Salmonella spp. Η ανάπτυξη της εν λόγω μεθοδολογίας περιλάμβανε τον απαραίτητο σχεδιασμό ειδικών εκκινητών και τον προσδιορισμό των βέλτιστων συνθηκών (θερμοκρασία υβριδισμού των εκκινητών και συγκέντρωση χλωριούχου μαγνησίου) για την ενίσχυση του εν λόγω τμήματος DNA. Τα προϊόντα της PCR ηλεκτροφορήθηκαν σε πήκτωμα αγαρόζης 1,5%. Με την αναπτυχθείσα μεθοδολογία, κατέστη δυνατή η ανίχνευση της Salmonella spp., ακόμα και σε τρόφιμα που είχαν επωαστεί επί ≥4 ώρες μετά την επιμόλυνση. Συμπερασματικά, αναπτύχθηκε μια νέα, in-house μεθοδολογία PCR για την ανίχνευση της Salmonella spp. σε τρόφιμα ευρείας κατανάλωσης μειώνοντας τα επίπεδα κινδύνου γαστρεντερικών παθήσεων μέσω μόλυνσης τροφίμων. Salmonella is a Gram-negative bacterium of the Enterobacteriaceae family. The species which causes the human disease is called Salmonella enterica. Salmo-nella spp. is transferred through the intestinal-oral route. The most common mode of transmission is the consumption of food or water contaminated with feces. Consumption of raw or incompletely cooked and contaminated food can re-sult in infection. The infectious dose of Salmonella spp. varies, but high-fat foods such as chocolate and cheese protect the microorganism from the gastric acid re-ducing the infectious dose down to a few microorganisms. In the present study, we developed a novel, highly sensitive PCR assay for the detection of Salmonella spp. in raw vegetables. For this purpose, foodstuffs were spiked-in with 1-10 CFU Sal-monella typhimurium and incubated at 37oC for 2h, 4h, 8h, 12h and 16h in buffer peptone water (BPW). Samples without contamination from Salmonella typhimuri-um were also included in the experimental setting as controls. Following incubation, extraction of DNA was performed using silica-based DNA extraction columns according to manufacturer's instructions. A novel PCR as-say for Salmonella spp. detection was developed against a 779-bp amplicon of the rseB gene (sigma-E factor regulatory protein RseB precursor). The development of the PCR assay included the design and synthesis of a specific PCR primer pair and the optimization of the PCR protocol. The electrophoretic separation of the PCR products was performed in a 1.5% agarose gel. The aforementioned assay enabled the detection of Salmonella spp. in the samples incubated for ≥4h following con-tamination. In conclusion, a novel in-house PCR methodology was developed and optimized for the specific detection of Salmonella spp. in widely consumed foods by reducing the risk of gastrointestinal diseases through food contamination. 2017-11-07T13:03:37Z 2017-11-07T13:03:37Z 2017-06 https://vsmart.lib.aegean.gr/webopac/FullBB.csp?WebAction=ShowFullBB&EncodedRequest=*90*8E*40vn*A6V*B2B*90*A7cA*9A*8B2&Profile=Default&OpacLanguage=gre&NumberToRetrieve=50&StartValue=1&WebPageNr=1&SearchTerm1=2017%20.1.118813&SearchT1=&Index1=Keywordsbib&SearchMethod=Find_1&ItemNr=1 http://hdl.handle.net/11610/17603 el_GR Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Διεθνές http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ 149 σ., clxxvii application/pdf Λήμνος
|
| spellingShingle |
Τρόφιμα-βακτήρια
Σαλμονέλα
PCR
Food bacteria
Bacteria
Salmonella
Bacteria (URL: http://id.loc.gov/authorities/subjects/sh85010813)
Salmonella (URL: http://id.loc.gov/authorities/subjects/sh86004896)
Αποστολοπούλου, Ξένια
Apostolopoulou, Xenia
Ανίχνευση βακτηρίων του γένους Salmonella (Salmonella spp.) σε τρόφιμα ευρείας κατανάλωσης με νέα, υψηλής ευαισθησίας, in-house αναπτυχθείσα μεθοδολογία PCR
|
| title |
Ανίχνευση βακτηρίων του γένους Salmonella (Salmonella spp.) σε τρόφιμα ευρείας κατανάλωσης με νέα, υψηλής ευαισθησίας, in-house αναπτυχθείσα μεθοδολογία PCR
|
| title_full |
Ανίχνευση βακτηρίων του γένους Salmonella (Salmonella spp.) σε τρόφιμα ευρείας κατανάλωσης με νέα, υψηλής ευαισθησίας, in-house αναπτυχθείσα μεθοδολογία PCR
|
| title_fullStr |
Ανίχνευση βακτηρίων του γένους Salmonella (Salmonella spp.) σε τρόφιμα ευρείας κατανάλωσης με νέα, υψηλής ευαισθησίας, in-house αναπτυχθείσα μεθοδολογία PCR
|
| title_full_unstemmed |
Ανίχνευση βακτηρίων του γένους Salmonella (Salmonella spp.) σε τρόφιμα ευρείας κατανάλωσης με νέα, υψηλής ευαισθησίας, in-house αναπτυχθείσα μεθοδολογία PCR
|
| title_short |
Ανίχνευση βακτηρίων του γένους Salmonella (Salmonella spp.) σε τρόφιμα ευρείας κατανάλωσης με νέα, υψηλής ευαισθησίας, in-house αναπτυχθείσα μεθοδολογία PCR
|
| title_sort |
ανίχνευση βακτηρίων του γένους salmonella salmonella spp σε τρόφιμα ευρείας κατανάλωσης με νέα υψηλής ευαισθησίας in house αναπτυχθείσα μεθοδολογία pcr
|
| topic |
Τρόφιμα-βακτήρια
Σαλμονέλα
PCR
Food bacteria
Bacteria
Salmonella
Bacteria (URL: http://id.loc.gov/authorities/subjects/sh85010813)
Salmonella (URL: http://id.loc.gov/authorities/subjects/sh86004896)
|
| url |
https://vsmart.lib.aegean.gr/webopac/FullBB.csp?WebAction=ShowFullBB&EncodedRequest=*90*8E*40vn*A6V*B2B*90*A7cA*9A*8B2&Profile=Default&OpacLanguage=gre&NumberToRetrieve=50&StartValue=1&WebPageNr=1&SearchTerm1=2017%20.1.118813&SearchT1=&Index1=Keywordsbib&SearchMethod=Find_1&ItemNr=1
http://hdl.handle.net/11610/17603
|
| work_keys_str_mv |
AT apostolopoulouxenia anichneusēbaktēriōntougenoussalmonellasalmonellasppsetrophimaeureiaskatanalōsēsmeneaypsēlēseuaisthēsiasinhouseanaptychtheisamethodologiapcr
AT apostolopoulouxenia anichneusēbaktēriōntougenoussalmonellasalmonellasppsetrophimaeureiaskatanalōsēsmeneaypsēlēseuaisthēsiasinhouseanaptychtheisamethodologiapcr
AT apostolopoulouxenia detectionofbacteriaofthesalmonellagenussalmonellasppinwidelyconsumedfoodswithanovelhighlysensitiveinhousedevelopedpcrmethodology
AT apostolopoulouxenia detectionofbacteriaofthesalmonellagenussalmonellasppinwidelyconsumedfoodswithanovelhighlysensitiveinhousedevelopedpcrmethodology
|