Ανίχνευση βακτηρίων του γένους Salmonella (Salmonella spp.) σε τρόφιμα ευρείας κατανάλωσης με νέα, υψηλής ευαισθησίας, in-house αναπτυχθείσα μεθοδολογία PCR: - Αποστολοπούλου, Ξένια Κ. (2017)
Η Salmonella είναι ένα αρνητικό κατά Gram βακτήριο της οικογένειας των εντεροβακτηριοειδών. Το είδος το οποίο προκαλεί νόσο στον άνθρωπο είναι το Salmonella enterica. Η Salmonella spp. μεταδίδεται μέσω της έντερο-στοματικής οδού. Ο συχνότερος τρόπος μετάδοσης είναι η κατανάλωση μολυσμένου με κόπρανα τρόφιμου ή νερού. Η κατανάλωση ωμού ή ατελώς μαγειρεμένου μολυσμένου τρόφιμου μπορεί να οδηγήσει σε λοίμωξη. Η μολυσματική δόση της Salmonella spp. κυμαίνεται, αλλά πλούσιες σε λίπη τροφές όπως η σοκολάτα και το τυρί προστατεύουν το μικροοργανισμό από το γαστρικό οξύ, μειώνοντας τη μολυσματική δόση σε λίγους μικροοργανισμούς. Στη συγκεκριμένη μελέτη, έγινε ανάπτυξη μοριακής μεθοδολογίας PCR για την ανίχνευση βακτηρίων του γένους Salmonella σε ωμά λαχανικά. Για το σκοπό αυτό, τρόφιμα επιμολύνθηκαν σκοπίμως (spike-in) με 1-10 CFU Salmonella typhimurium και επωάσθηκαν σε θερμοκρασία 37οC για 2, 4, 8, 12 και 16 ώρες σε ρυθμιστικό πεπτονούχο νερό. Ως θετικός μάρτυρας στα ακόλουθα πειράματα, χρησιμοποιήθηκαν τα αντίστοιχα τρόφιμα, τα οποία επωάστηκαν χωρίς προηγουμένως να έχουν επιμολυνθεί με Salmonella typhimurium. Ακολούθως, απομονώθηκε από αυτά DNA με χρήση κατάλληλων στηλών. Η μοριακή μεθοδολογία PCR αναπτύχθηκε για την ενίσχυση ενός τμήματος 779 bp του γονιδίου rseB (sigma-E factor regulatory protein RseB precursor) της Salmonella spp. Η ανάπτυξη της εν λόγω μεθοδολογίας περιλάμβανε τον απαραίτητο σχεδιασμό ειδικών εκκινητών και τον προσδιορισμό των βέλτιστων συνθηκών (θερμοκρασία υβριδισμού των εκκινητών και συγκέντρωση χλωριούχου μαγνησίου) για την ενίσχυση του εν λόγω τμήματος DNA. Τα προϊόντα της PCR ηλεκτροφορήθηκαν σε πήκτωμα αγαρόζης 1,5%. Με την αναπτυχθείσα μεθοδολογία, κατέστη δυνατή η ανίχνευση της Salmonella spp., ακόμα και σε τρόφιμα που είχαν επωαστεί επί ≥4 ώρες μετά την επιμόλυνση. Συμπερασματικά, αναπτύχθηκε μια νέα, in-house μεθοδολογία PCR για την ανίχνευση της Salmonella spp. σε τρόφιμα ευρείας κατανάλωσης μειώνοντας τα επίπεδα κινδύνου γαστρεντερικών παθήσεων μέσω μόλυνσης τροφίμων.