| Description: |
Тихонов Сергей Леонидович, профессор кафедры пищевой инженерии аграрного производства, д-р техн. наук, профессор, Уральский государственный аграрный университет; профессор кафедры химической технологии древесины, биотехнологии и наноматериалов, Уральский государственный лесотехнический университет, Екатеринбург, Россия; tihonov75@bk.ru Тихонова Наталья Валерьевна, заведующий кафедрой пищевой инженерии аграрного производства, д-р техн. наук, профессор, Уральский государственный аграрный университет, Екатеринбург, Россия; tihonov75@bk.ru Валиева Шолпан Сергеевна, аспирант, Уральский государственный аграрный университет, Екатеринбург, Россия; sholpan.v85@gmail.com Шихалев Сергей Валерьевич, доцент кафедры пищевой инженерии, канд. техн. наук, доцент, Уральский государственный экономический университет, Екатеринбург, Россия; sershih@rambler.ru Sergey L. Tikhonov, Professor of the Department of Food Engineering of Agricultural Production, Doctor of Technical Sciences, Professor, Ural State Agrarian University; Professor of the Department of Chemical Technology of Wood, Biotechnology and Nanomaterials, Ural State Forestry University, Yekaterinburg, Russia; tihonov75@bk.ru Natalia V. Tikhonova, Head of the Department of Food Engineering of Agricultural Production, Doctor of Technical Sciences, Professor, Ural State Agrarian University, Yekaterinburg, Russia; tihonov75@bk.ru Sholpan S. Valieva, Postgraduate student, Ural State Agrarian University, Yekaterinburg, Russia; sholpan.v85@gmail.com Sergey V. Shikhalev, Associate Professor of the Department of Food Engineering, Candidate of Technical Sciences, Associate Professor, Ural State University of Economics, Yekaterinburg, Russia; sershih@rambler.ru Проведены исследования по конструированию биоактивной устойчивой к протеолизу пептидной последовательности белка CDF-11 с последующим синтезом плазмиды, кодирующей его экспрессию в E.coli. Прогнозирование биологической активности, устойчивости к протеолизу и биодоступности пептидной последовательности проводили на платформе ADMET. Синтез плазмид пептидной последовательности нового рекомбинантного белка осуществляли в Российской биотехнологической компании «Евроген» (г. Москва) методом циклической сборки из олигонуклеотидов. Молекулярно-массовое распределение пептидной последовательности оценивали масс-спектрометрическим методом. Идентификацию пептида осуществляли методом MALDI-TOF MS Ultraflex. Проведена циклизация пептидной последовательности белка GDF-11 LQIIYGKIPR путем введения и сшивания трех остатков цистеина. В результате получена новая последовательность LQСIIYСGKIСPR. Прогнозируемые значения показателей биодоступности и клинического применения нового пептида свидетельствуют об эффективности предложенной его модификации и возможности перорального применения. Для экспрессии рекомбинантного белка с повышенной стабильностью к протеолизу и биодоступностью, содержащего последовательность циклического пептида, получена и синтезирована плазмида, определена последовательность аминокислот в ней. Дальнейшие исследования будут направлены на экспрессию модифицированного белка GDF 11 mut в E.coli. Studies have been conducted on the construction of a bioactive proteolysis-resistant peptide sequence of the CDF-11 protein followed by the synthesis of a plasmid encoding its ex-pression in E.coli. The prediction of biological activity, resistance to proteolysis and bioavailability of the peptide sequence was carried out on the ADMET platform. The synthesis of plasmids of the peptide sequence of a new recombinant protein was carried out in the Russian biotechnology company “Eurogen” (Moscow) by cyclic assembly of oligonucleotides. The molecular weight distribution of the peptide sequence was evaluated by mass spectrometry. The peptide sequence was identified by the MALDI-TOF MS Ultraflex method. The peptide sequence of the GDF-11 LQIIYGKIPR protein was cyclized by introducing and crosslinking three cysteine residues and a new LQIIYGKIPR sequence was obtained. The predicted values of the bioavailability and clinical use of the new peptide indicate the effectiveness of its proposed modification and the possibility of oral administration. For the expression of a recombinant protein with increased stability to proteolysis and bioavailability containing a cyclic peptide sequence, a plasmid was obtained and synthesized, and the sequence of amino acids in it was determined. Further research will focus on the expression of the modified GDF 11 mut protein in E.coli. |