Academic Journal
Количество пролиновых остатков в HlyIICTD определяет его изомеризацию
| Τίτλος: | Количество пролиновых остатков в HlyIICTD определяет его изомеризацию |
|---|---|
| Πηγή: | IX Всероссийская Пущинская конференция «Биохимия, физиология и биосферная роль микроорганизмов». |
| Στοιχεία εκδότη: | Crossref, 2024. |
| Έτος έκδοσης: | 2024 |
| Θεματικοί όροι: | цис- и транс-формы, моноклональные антитела, электрофоретическая подвижность, гемолизин II B. cereus |
| Περιγραφή: | Гемолизин II Bacillus cereus относится к порообразующим бета-складчатым токсинам и имеет С-концевое удлинение из 94 аминокислотных остатков, обозначенное как HlyIICTD (C-концевой домен) [1]. На сегодняшний день функция и роль HlyIICTD в формировании пор и цитолизе еще не выяснены. Изучение функционирования и значения отдельных частей гемолизина II может приблизить нас к пониманию этапов порообразования. Рекомбинантный белок HlyIICTD был использован для получения моноклональных антител [2]. При денатурирующем электрофорезе очищенного белка выявляются несколько изоформ HlyIICTD с различной электрофоретической подвижностью . [3]. Было сделано предположение, что появление изоформ связано с наличием остатка пролина в 405 положении (нумерация соответствует полной длине токсина HlyII B. cereus 14579T). Для этого были получены генно-инженерные конструкции HlyIICTD, содержащие разное количество остатков пролина. Анализ элетрофореграмм полученных рекомбинантных белков показал, что у белка, не содержащего пролина как мономерная, так и димерная и олигомерная формы белка демонстрируют одну изоформу, белок с одним пролином – две изоформы в олигомерном состоянии, у белка с двумя пролинами выявляются 4 изоформы в мономерном состоянии. Белок c 3-мя пролинами должен демонстрировать 8 изоформ. При анализе иммуноблоттинга препаратов HlyIICTD выявлено, что в олигомерной и димерной форме существуют только гомоолигомерные изоформы, так как количество выявляемых полос соответствует количеству изоформ. При наличии гетероолигомерных форм белка количество выявляемых полос было бы значительно больше. Предварительные эксперименты по разделению изоформ с помощью гель-фильтрации позволяют предположить возможность выделения отдельных изоформ HlyIICTD. Таким образом, предположение о цис/транс-изомеризации остатков пролина в HlyIICTD как основе появление изоформ мы считаем доказанным. HlyIICTD находится в динамическом равновесии благодаря цис/транс-изомеризации его пептидной связи Gly404–Pro405. Цис- и транс-формы находятся в эквимолярных количествах [4]. HlyIICTD в котором пролин был заменен метионином, стабилизируя исключительно транс-состояние, использовался для проведения ЯМР-исследованиий [5]. ЯМР-исследование 3D-структуры HlyIICTD продемонстрировало его уникальность, заключающуюся в предполагаемом наличии двух субдоменов. На сегодняшний день молекул подобной структуры не обнаружено. Мы ожидаем, что изучение HlyIICTD прольет свет на новые функции его необнаруженных структурных гомологов. Множество изоформ белков могут обеспечивать лабильность их пространственных структур и расширять функциональные возможности. |
| Τύπος εγγράφου: | Article Conference object |
| Γλώσσα: | Russian |
| DOI: | 10.34756/geos.2023.17.38697 |
| Αριθμός Καταχώρησης: | edsair.doi...........594ff917c34ca57ee91dfd38c2b89829 |
| Βάση Δεδομένων: | OpenAIRE |
| DOI: | 10.34756/geos.2023.17.38697 |
|---|