| Περιγραφή: |
Печень – полифункциональный орган животных, обеспечивающий гомеостаз в организме. Она участвует во всех видах обмена, выполняет барьерную функцию между организмом и средой, накапливает и нейтрализует токсиканты (Безель, 2006; Pereira et al., 2006; Ивантер, Медведев, 2015). Признаки морфологических изменений печени используют в качестве биомаркеров токсического воздействия. На тканевом уровне исследуют признаки воспаления, фиброза или дистрофии, на клеточном – качественные (наличие гранул, вакуолей или липидных капель, деформированных ядер) и количественные признаки (размеры и плотность клеток, ядерно-цитоплазматическое отношение и др.)(Pereira et al., 2006). Печень анатомически разделена вырезками на доли, количество которых у млекопитающих варьирует. На тканевом уровне в печени выделяют ацинусы – мельчайшие участки паренхимы, ориентированные вокруг оси, состоящей из терминальных разветвлений портальной вены и печеночной артерии. По мере удаления от них ацинус подразделяется на три концентрические зоны клеток (в первую очередь, самых многочисленных – гепатоцитов): афферентную, промежуточную и эфферентную (зоны 1–3 соответственно) (Rappaport et al., 1954). Считают, что зональное распределение гепатоцитов в ацинусе определяет их структурную и функциональную гетерогенность (Gebhardt, MatzSoja,2014). Гетерогенность клеток обусловлена различной концентрацией кислорода, гормонов и метаболитов в ацинусе (Rappaport et al., 1954). С учетом сложной анатомической структуры печени (расчлененность на доли) и гетерогенности печеночной ткани, возникает вопрос о влиянии выбора участка на морфометрические характеристики клеток, например, плотность гепатоцитов. Гепатоциты – основные клетки печеночной паренхимы, качественные и количественные изменения которых обусловливают перестройки метаболизма как самого органа, таки взаимосвязанных с ним систем организма. Плотность гепатоцитов (количество клеток на единицу площади) – счетный признак, который используют для выявления и формализации структурных нарушений в печеночной ткани. Цель этой работы – оценить на примере модельного вида грызунов(рыжая полевка) плотность одноядерных гепатоцитов в каждой доле печени (за исключением самой маленькой – сосочковой) и двух контрастных зонах ацинуса (1й и 3й). Мы предположили, что этот признак будет различаться в разных зонах ацинуса. В то же время, основываясь на данных эмбрионального и постэмбрионального развития печени (Уша, 1979), мы не ожидали обнаружить различия между долями. Для исследования выбрали рыжую полевку (Clethrionomys glareolus (Schreber, 1780)) – широко распространенный вид в лесных экосистемах бореальной зоны. Животных отлавливали с помощью живоловок в пихтово-еловых лесах (Средний Урал). После умерщвления цервикальной дислокацией производили необходимые измерения: определяли пол, массу и размеры тела, а также массу печени. В выборку включили 10 самцов и 10 самок одной репродуктивно возрастной группы(неполовозрелые сеголетки). Печень полевок сразу после вскрытия помещали в 10%й раствор формалина. После фиксации орган разделяли на 6 анатомических долей: правую и левую медиальную, правую и левую латеральную, хвостатую, сосочковую. Сосочковую долю из-за ее малых размеров и расчлененности не исследовали. Для микроскопического исследования из каждой доли готовили парафиновые срезы, которые окрашивали гематоксилином и эозином. Всего подготовлено 100 препаратов печени, которые исследовали с помощью камеры Leica DFC 295 микроскопа Leica DM1000 LED (Германия) (ув. об. ×63) и программного обеспечения ImageScope M (Россия). В каждом поле зрения определяли количество одноядерных гепатоцитов. Площадь одного поля зрения на снимке составляла 10 000 мкм2. Для каждой особи просмотрено 50полей зрения. Анализ данных выполняли в пакете Statistica 8.0. Данные по 5типолям зрения суммировали для каждой зоны ацинуса. Зависимость плотности гепатоцитов от того или иного фактора (при учете остальных) исследовали с помощью моделей GRM/GLM, значения плотности клеток предварительно логарифмировали. Оценивали эффекты следующих факторов: пол животного, доля печени, зона ацинуса. В результате различия в плотности одноядерных гепатоцитов обнаружены между самцами и самками и зонами ацинуса. Однако, несмотря на статистическую значимость, различия оказались малы: у самцов этот показатель всего на 3% меньше, чем у самок, а в 1й зоне ацинуса на 6% меньше, чем в 3й. В разных долях печени этот показатель не различался (табл. 1). Функциональные различия гепатоцитов (на уровне ацинуса) между самцами и самками лабораторных животных (крыс и мышей) ранее обнаруживали и другие исследователи (Sirma et al., 1996; Massimi et al., 1999). Вероятно, половые гормоны регулируют активность и распределение ферментов в печени, что также отражается на морфологии клеток. Можно предположить, что с наступлением половой зрелости(увеличением секреции гонадостероидов) различия между самцами и самками будут увеличиваться. Морфологическую гетерогенность гепатоцитов в разных зонах ацинуса можно объяснить балочным строением печеночной ткани, при котором клетки неправильными рядами (печеночными трабекулами или балками) сходятся к центральной вене – 3й зоне ацинуса. Поскольку эта зона наиболее чувствительна к действию повреждающих факторов(Rappaport et al., 1954), в функциональном отношении высокая плотность гепатоцитов может служить дополнительным резервом гликогена в случае повреждения органа. Наши предположения подтвердились: плотность одноядерных гепатоцитов была одинаковой в разных долях печени, но различалась в разных зонах ацинуса и у животных разного пола. Несмотря на то, что исследуемая группа животных была максимально однородной, мощность анализа позволила «уловить» небольшие (3–6%) различия плотности гепатоцитов. Это означает, что при «достройке» нашего экспериментального плана (добавлении других факторов, например, возраста, загрязнения среды и т.д.) могут быть оценены не менее слабые эффекты. Однозначный ответ на свой вопрос мы получили относительно выбора доли печени – для морфометрического исследования гепатоцитов можно использовать образцы ткани из любой доли. |